CSN8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409800-ACT

COPS8 codifica CSN8, una subunità centrale del signalosoma COP9 che regola l’attività delle ubiquitin ligasi cullin-RING tramite la deneddilazione, modulando così il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Controllando la stabilità di regolatori chiave del ciclo cellulare, fattori della risposta al danno al DNA e intermedi della segnalazione dello stress, CSN8 contribuisce a coordinare proteostasi, proliferazione e adattamento ai segnali ambientali. La funzione di CSN8 interseca vie legate ad apoptosi, autofagia e segnalazione infiammatoria, a testimonianza del ruolo centrale dell’attività del signalosoma COP9 nell’omeostasi cellulare. Un’alterazione della segnalazione ubiquitinica associata a CSN8 è stata implicata in meccanismi rilevanti per la patologia, come una progressione anomala del ciclo cellulare, una funzione del proteasoma modificata e uno squilibrio delle vie di risposta allo stress in diversi contesti tissutali.

CSN8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COPS8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CSN8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COPS8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COPS8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CSN8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COPS8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CSN8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CSN8 nelle cellule tumorali con espressione di COPS8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.