Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmide Double Nickase (m): sc-432122-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase Plasmid (m) e il Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nlrp3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-432122-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432122-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Nlrp3** codifica la **criopirina** (NALP3/NLRP3), un recettore citosolico di riconoscimento di pattern (pattern-recognition receptor) che funge da nucleo per l’**inflammasoma NLRP3** in risposta a diversi segnali di pericolo, quali ATP, particolati cristallini, stress mitocondriale e flussi ionici. L’assemblaggio dell’inflammasoma promuove l’attivazione di **caspasi-1** dipendente da **ASC**, determinando la maturazione di **IL-1β** e **IL-18** e innescando la **piroptosi** mediata da **gasdermina D**, collegando così il riconoscimento innato al rilascio di citochine infiammatorie. La segnalazione di NLRP3 interagisce con il priming di **NF-κB**, con le vie dei **ROS** e del danno lisosomiale, e con programmi più ampi di attivazione mieloide. Un’attività di NLRP3 deregolata è ampiamente utilizzata come modello meccanicistico di infiammazione sterile e di fenotipi autoinfiammatori rilevanti in contesti metabolici, neuroinfiammatori e di danno tissutale.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nlrp3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nlrp3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nlrp3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nlrp3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.