Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CRY1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400946-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRY1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CRY1 Double Nickase Plasmid (h) e il CRY1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRY1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CRY1 Antibody (H-12): sc-393466
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRY1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400946-NIC | 20 µg | $410.00 |
CRY1 (regolatore circadiano criptocromo 1) codifica un componente fondamentale dell’orologio circadiano dei mammiferi, che agisce all’interno del circuito di retroazione trascrizionale–traduzionale reprimendo l’espressione genica guidata da CLOCK–BMAL1. Integrandosi con le proteine PER e con complessi regolatori associati, CRY1 contribuisce a coordinare il controllo ritmico del metabolismo, della tempistica del ciclo cellulare, delle risposte al danno al DNA e della segnalazione endocrina nei diversi tessuti. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di CRY1 sono state collegate alla perturbazione dei ritmi circadiani e a effetti a valle sulla regolazione sonno–veglia e sull’omeostasi metabolica; per questo è spesso studiato nel contesto delle reti trascrizionali controllate dall’orologio. Queste proprietà rendono CRY1 un nodo utile per indagare come la regolazione temporale plasmi la fisiologia cellulare e l’adattamento allo stress.
CRY1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRY1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRY1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRY1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRY1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.