Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CRM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-400348-KO-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRM1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CRM1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CRM1 Antibody (C-1): sc-74454
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2) | sc-400348-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
XPO1 codifica per il recettore di esportazione nucleare CRM1, una proteina della famiglia delle carioferine-β che riconosce segnali di esportazione nucleare ricchi di leucina e media il trasporto, dipendente da RanGTP, di proteine e di specifici RNA dal nucleo al citoplasma. Controllando il traffico nucleo-citoplasmatico, CRM1 regola la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e i programmi trascrizionali attraverso la localizzazione di carichi quali oncosoppressori, fattori di trascrizione e complessi ribonucleoproteici. La funzione di CRM1 si integra con il ciclo della GTPasi Ran e con la dinamica del complesso del poro nucleare per mantenere una compartimentalizzazione dei segnali e l’omeostasi proteica. L’attività deregolata di XPO1/CRM1 e l’alterata distribuzione dei carichi sono frequentemente studiate in oncologia, nelle risposte antivirali e nei meccanismi neurodegenerativi in cui il trasporto nucleo–citoplasmatico risulta perturbato.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CRM1 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene XPO1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del XPO1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto XPO1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CRM1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di XPO1 per lo studio della segnalazione di CRM1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni XPO1 critici per la funzione di CRM1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di XPO1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CRM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CRM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus XPO1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CRM1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CRM1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia XPO1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio XPO1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.