Plásmido CRISPR de Activación (m) CPTI: sc-419786-ACT

El gen murino **Cpt1a** codifica la carnitina palmitoiltransferasa 1A (CPTI), la enzima limitante de la velocidad que controla la importación mitocondrial de ácidos grasos de cadena larga para la β‑oxidación mediante la lanzadera de carnitina. Al regular la producción de acetil‑CoA y el flujo energético, la CPTI integra la disponibilidad de nutrientes con la respiración mitocondrial e influye en la homeostasis lipídica, el equilibrio redox y la señalización metabólica. La actividad de **Cpt1a** moldea las respuestas celulares al ayuno y a condiciones ricas en grasa y contribuye a la remodelación metabólica en tejidos con alta demanda oxidativa. La desregulación de la oxidación de ácidos grasos vinculada a la CPTI se ha asociado con fenotipos metabólicos relevantes para la sensibilidad a la insulina, el manejo hepático de lípidos y estados de activación inflamatoria en modelos murinos.

CPTI El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cpt1a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CPTI El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cpt1a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cpt1a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CPTI. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cpt1a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CPTI en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CPTI en células tumorales con expresión de Cpt1a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.