CPSF2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407012

Panoramica

CPSF2 (fattore di specificità per il clivaggio e la poliadenilazione, subunità 2) è un componente centrale della macchina di processamento dell’estremità 3′ dell’mRNA nei mammiferi e contribuisce al riconoscimento dei segnali di poliadenilazione e all’assemblaggio del complesso di clivaggio e poliadenilazione. Attraverso il suo ruolo nel clivaggio del pre-mRNA e nell’aggiunta della coda poli(A), CPSF2 influenza la maturazione dei trascritti, la stabilità dell’mRNA e l’efficienza di traduzione, modellando così i programmi globali di espressione genica. Il processamento dell’estremità 3′ dipendente da CPSF2 si interfaccia inoltre con la terminazione della trascrizione e con la poliadenilazione alternativa, processi che rimodellano il trascrittoma durante proliferazione e differenziamento. La disregolazione della formazione dell’estremità 3′ e della selezione dei siti di poliadenilazione è frequentemente osservata in stati di espressione associati a malattie, rendendo CPSF2 un nodo utile per studiare i fenotipi di processamento dell’RNA e i loro effetti cellulari a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CPSF2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CPSF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CPSF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CPSF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CPSF2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CPSF2 per lo studio della segnalazione di CPSF2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CPSF2 critici per la funzione di CPSF2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CPSF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CPSF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CPSF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CPSF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CPSF2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CPSF2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CPSF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CPSF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.