CNPase Plasmide Double Nickase (h): sc-402463-NIC

Il gene CNP umano codifica la 2′,3′-nucleotide ciclico 3′-fosfodiesterasi (CNPasi), un enzima associato alla mielina, arricchito negli oligodendrociti e nelle cellule di Schwann, che idrolizza i nucleotidi ciclici 2′,3′ in nucleotidi 2′. La CNPasi sostiene la formazione e il mantenimento della guaina mielinica influenzando l’estensione dei processi oligodendrogliali, la dinamica del citoscheletro e il traffico di ribonucleoproteine associate all’RNA alla membrana plasmatica. Attraverso queste funzioni, la CNPasi contribuisce alle interazioni assone–glia e alla stabilità dei domini mielinici compatti e non compatti nel sistema nervoso. Alterazioni dell’espressione di CNP o dell’attività della CNPasi sono state collegate a demielinizzazione, disfunzione della sostanza bianca e contesti neuroinfiammatori, rendendo questa via rilevante per studi meccanicistici sull’integrità della mielina e sulla stabilità dei circuiti neurali.

CNPase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CNP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CNP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CNP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CNP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.