CNOT6 Plasmide Double Nickase (h2): sc-406273-NIC-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CNOT6 Plasmide Double Nickase (h2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CNOT6 Double Nickase Plasmid (h2) e il CNOT6 Double Nickase Plasmid (h22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CNOT6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CNOT6 Antibody (2193C2a): sc-81231
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CNOT6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406273-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano CNOT6 codifica la subunità 6 del complesso CCR4-NOT, una deadenilasi citoplasmatica che accorcia le code poli(A) degli mRNA per favorire la destabilizzazione dei trascritti e la repressione della traduzione, contribuendo così a modellare i programmi di espressione genica a valle delle proteine leganti l’RNA e del silenziamento mediato dai microRNA. In quanto componente catalitico del complesso CCR4-NOT, CNOT6 partecipa al controllo post-trascrizionale della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e delle risposte allo stress attraverso un turnover regolato degli mRNA e interazioni con la macchina di decapping e degradazione. Un’attività deregolata di CNOT6 e l’omeostasi dell’RNA dipendente da CCR4-NOT sono state associate ad alterazioni della segnalazione proliferativa e a pattern di espressione di geni immuno-correlati osservati in diversi tumori e contesti infiammatori. L’editing genetico o la perturbazione di CNOT6 consente studi meccanicistici sulla cinetica del decadimento degli mRNA, sulla dinamica delle code poli(A) e sugli effetti a livello di via sulla stabilità del trascrittoma in modelli cellulari umani.
CNOT6 Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CNOT6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CNOT6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CNOT6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CNOT6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.