CLS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407799-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CLS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CLS1 Double Nickase Plasmid (h) e il CLS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRLS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CLS1 Antibody (E-8): sc-514986
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CLS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407799-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLS1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407799-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRLS1 codifica la cardiolipina sintasi 1 (CLS1), un enzima della membrana interna mitocondriale che catalizza l’ultimo passaggio della biosintesi della cardiolipina a partire da fosfatidilglicerolo e CDP-diacilglicerolo. La cardiolipina è un fosfolipide caratteristico, necessario per l’organizzazione e la stabilità dei complessi della fosforilazione ossidativa, per il mantenimento dell’architettura delle creste e per una produzione efficiente di ATP mitocondriale. Attraverso il suo ruolo nel rimodellamento dei lipidi mitocondriali e nella funzione della catena respiratoria, CLS1 influenza la segnalazione dell’apoptosi, la mitofagia e le risposte cellulari allo stress metabolico. Le alterazioni dell’omeostasi della cardiolipina e la compromissione della bioenergetica mitocondriale associate a disfunzione di CRLS1 sono rilevanti per studi sulla fisiopatologia neuromuscolare e cardiometabolica, oltre che per i meccanismi più generali delle malattie mitocondriali.
CLS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRLS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRLS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRLS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRLS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.