CLIC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402391-NIC

CLIC1 codifica il canale intracellulare del cloruro 1, una proteina metamorfica che può esistere come fattore citosolico solubile oppure associarsi alle membrane cellulari, influenzando la conduttanza al cloruro, l’equilibrio redox e la regolazione del pH intracellulare. È stata collegata alla regolazione del volume cellulare, alla dinamica del citoscheletro e al traffico vescicolare, ed è spesso studiata nel contesto delle risposte allo stress ossidativo e della segnalazione infiammatoria. È stato riportato che l’attività e l’espressione di CLIC1 cambiano durante l’attivazione delle cellule immunitarie e la trasformazione cellulare, a supporto dell’indagine sul suo contributo ai programmi di proliferazione, migrazione e sopravvivenza. Una deregolazione di CLIC1 è stata associata a molteplici contesti patologici, tra cui la biologia dei tumori e la neuroinfiammazione, rendendola un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di adattamento allo stress e le vie dell’omeostasi ionica.

CLIC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLIC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLIC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLIC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLIC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.