Chk2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400438-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Chk2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Chk2 Double Nickase Plasmid (h) e il Chk2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CHEK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Chk2 Antibody (A-11): sc-17747
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Chk2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400438-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Chk2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400438-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHEK2 codifica la checkpoint kinase 2 (Chk2), una chinasi serina/treonina attivata a valle di ATM in risposta alle rotture a doppio filamento del DNA. In seguito alla fosforilazione, Chk2 propaga il segnale di danno al DNA per regolare i checkpoint del ciclo cellulare, coordinare la riparazione del DNA e indurre l’apoptosi attraverso substrati quali p53, le fosfatasi CDC25 e BRCA1. Questa via integra i segnali di stress genomico con il controllo della replicazione per preservare l’integrità del genoma durante la fase S e la mitosi. Un’alterata segnalazione CHEK2/Chk2 e varianti ereditarie o acquisite sono state associate a fenotipi di instabilità genomica e a una maggiore suscettibilità al cancro, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per studiare i circuiti della risposta al danno del DNA.
Chk2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHEK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHEK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHEK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHEK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.