Cdx2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401220-NIC

CDX2 codifica il fattore di trascrizione homeobox di tipo caudale Cdx2, un regolatore determinante del destino cellulare essenziale per la specificazione del trofectoderma e per la differenziazione dell’epitelio intestinale. Cdx2 si lega a elementi promotori/enhancer ricchi di AT per controllare programmi genici che governano polarità cellulare, proliferazione e maturazione, integrandosi con reti trascrizionali associate a Wnt/β-catenina, BMP e Notch durante lo sviluppo e l’omeostasi dell’intestino. L’espressione disregolata di CDX2 è comunemente utilizzata come caratteristica molecolare in ambito gastrointestinale e in altri contesti epiteliali, nei quali stati di differenziazione alterati e plasticità di linea sono collegati alla biologia tumorale e a un rimodellamento mucosale aberrante. In quanto regolatore trascrizionale nucleare, Cdx2 rappresenta un nodo accessibile per studiare il controllo dell’identità epiteliale dipendente dalla cromatina e la riprogrammazione adattativa allo stress.

Cdx2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDX2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDX2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDX2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDX2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.