Cdx1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402522-ACT

CDX1 codifica il fattore di trascrizione homeobox di tipo caudale Cdx1, un regolatore che si lega al DNA in modo specifico per la sequenza e contribuisce a stabilire la patterning antero-posteriore, guidando al contempo la differenziazione dell’epitelio intestinale. Nelle cellule umane, CDX1 si integra con reti di segnalazione dello sviluppo come Wnt/β-catenina e con programmi trascrizionali responsivi all’acido retinoico per controllare l’espressione genica ristretta alla linea cellulare e la maturazione epiteliale. Alterazioni dell’espressione di CDX1 sono state associate a cambiamenti del destino epiteliale e a stati di differenziazione deregolati nei tessuti gastrointestinali, rendendolo un utile riferimento molecolare per studiare il riassetto trascrizionale in modelli rilevanti per la malattia. In quanto regolatore homeobox, Cdx1 viene anche utilizzato per analizzare come gli elementi cis-regolatori e il contesto della cromatina influenzino le decisioni di identità cellulare.

Cdx1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cdx1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cdx1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cdx1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cdx1 nelle cellule tumorali con espressione di CDX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.