CDKN3 Plasmide Double Nickase (h): sc-403243-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CDKN3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CDKN3 Double Nickase Plasmid (h) e il CDKN3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDKN3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CDKN3 Antibody (39): sc-135864
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CDKN3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403243-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDKN3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403243-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN3 (inibitore 3 delle chinasi ciclina‑dipendenti) codifica una fosfatasi a duplice specificità che modula la progressione del ciclo cellulare defosforilando CDK1 e CDK2, influenzando così l’attività dei complessi ciclina‑CDK e il controllo dei checkpoint nelle transizioni G1/S e G2/M. Attraverso il suo impatto sull’ingresso in mitosi, sulla tempistica della replicazione del DNA e sui programmi proliferativi, CDKN3 si integra con le principali vie regolatorie del ciclo cellulare, inclusa la regolazione trascrizionale guidata da RB/E2F. Un’espressione deregolata di CDKN3 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso studiata per la sua associazione con firme proliferative, instabilità genomica e alterata fedeltà dei checkpoint. In quanto regolatore del ciclo cellulare umano con attività fosfatasica, CDKN3 è inoltre rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione della mitosi, sulle risposte allo stress e sulle vie che collegano la fosforegolazione alla proliferazione.
CDKN3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDKN3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDKN3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDKN3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDKN3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.