CDK5RAP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408965-ACT

CDK5RAP3 (nota anche come C53/LZAP) è una proteina regolatoria umana multifunzionale coinvolta nel controllo della progressione del ciclo cellulare, nelle risposte allo stress e nella trasduzione del segnale. È stata associata alla modulazione dei programmi legati a NF-κB e p53, influenzando gli output trascrizionali che regolano proliferazione, apoptosi e segnalazione infiammatoria. CDK5RAP3 partecipa inoltre alle vie dell’omeostasi proteica, includendo interazioni con il sistema ubiquitina–proteasoma e con i meccanismi di stress associati al reticolo endoplasmatico, che modellano l’adattamento cellulare a condizioni proteotossiche. Un’alterazione dell’espressione di CDK5RAP3 è stata riportata in diversi contesti oncologici e in altri disturbi caratterizzati da crescita e segnalazione da stress aberranti, a sostegno della sua utilità come nodo meccanicistico in vie rilevanti per la malattia.

CDK5RAP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDK5RAP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CDK5RAP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDK5RAP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDK5RAP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CDK5RAP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDK5RAP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CDK5RAP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CDK5RAP3 nelle cellule tumorali con espressione di CDK5RAP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.