Cdc6 Plasmide Double Nickase (h): sc-400796-NIC

CDC6 codifica l’ATPasi umana Cdc6, un componente centrale del complesso di pre-replicazione che coopera con ORC e CDT1 per caricare l’elicasi MCM2–7 sulle origini di replicazione, “licenziando” la sintesi del DNA durante la fase G1. L’attività di Cdc6 è coordinata con il controllo dipendente dalle CDK e con la segnalazione dei checkpoint di replicazione per garantire una duplicazione del genoma una sola volta per ciclo cellulare, collegando l’attivazione delle origini di replicazione alla progressione del ciclo cellulare e alle risposte al danno al DNA. Un’espressione o una funzione deregolata di CDC6 può favorire stress replicativo, instabilità genomica e un ingresso anomalo in fase S, processi frequentemente studiati nei disordini proliferativi e nella biologia del cancro. In quanto fattore di licensing della replicazione, Cdc6 è inoltre rilevante per studi sulla dinamica della cromatina, la selezione delle origini e i meccanismi che sopprimono la ri-replicazione.

Cdc6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDC6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDC6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDC6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDC6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.