CDC42 Plasmide Double Nickase (h): sc-418353-NIC

CDC42 codifica una piccola GTPasi della famiglia Rho espressa in modo ubiquitario, che agisce come interruttore molecolare controllando il rimodellamento del citoscheletro di actina, la polarità cellulare, il traffico di membrana e la citochinesi. Alternando gli stati legati a GTP e a GDP sotto il controllo di GEF, GAP e GDI, CDC42 coordina la segnalazione tramite effettori quali PAK, WASP/N-WASP e il complesso di polarità PAR, regolando la dinamica dell’adesione e la migrazione direzionale. Interseca vie che governano endocitosi, gemmazione delle vescicole e orientamento del fuso mitotico, collegando l’architettura del citoscheletro alla progressione del ciclo cellulare. Una segnalazione di CDC42 deregolata è stata associata a fenotipi di proliferazione e invasione alterati in ambito oncologico e a disturbi del neurosviluppo e del sistema immunitario, in cui polarità e traffico intracellulare risultano compromessi.

CDC42 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDC42 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDC42. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDC42. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDC42 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.