Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdc25A: sc-400345-ACT

CDC25A codifica Cdc25A, una fosfatasa de doble especificidad que activa las quinasas dependientes de ciclina al eliminar fosfatos inhibidores, promoviendo así la progresión G1/S y coordinando la replicación del ADN con el control de los puntos de control. Cdc25A integra señales de las vías de respuesta al daño del ADN, incluidas ATM/ATR–CHK1/CHK2, que regulan su estabilidad y actividad para restringir la entrada en el ciclo celular bajo estrés genotóxico. La expresión o el recambio desregulados de CDC25A pueden alterar la fidelidad de los puntos de control, aumentar el estrés replicativo y contribuir a la inestabilidad genómica observada en trastornos proliferativos. En consecuencia, CDC25A se estudia ampliamente en la regulación del ciclo celular, el tiempo de replicación y la remodelación de redes de respuesta al estrés en células humanas.

Cdc25A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDC25A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdc25A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDC25A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDC25A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdc25A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDC25A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdc25A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdc25A en células tumorales con expresión de CDC25A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.