CD9P-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404449

Panoramica

PTGFRN codifica CD9P-1 (nota anche come EWI-F), una proteina della superfamiglia delle immunoglobuline associata alle tetraspanine, che organizza microdomini di membrana tramite interazioni con CD9/CD81 e li collega al citoscheletro di actina. CD9P-1 contribuisce alla regolazione dell’adesione cellulare, della migrazione e della segnalazione coordinando complessi arricchiti in integrine e tetraspanine sulla membrana plasmatica. Questi processi si intrecciano con vie che governano il rimodellamento del citoscheletro, l’interazione con la matrice extracellulare e il traffico vescicolare, spesso analizzate negli studi sul comportamento invasivo e sul rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’espressione di PTGFRN e perturbazioni della rete di CD9P-1 sono state riportate in molteplici contesti associati a patologie, stimolando ricerche meccanicistiche nella biologia delle cellule tumorali e in fenotipi legati all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD9P-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTGFRN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTGFRN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTGFRN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD9P-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTGFRN per lo studio della segnalazione di CD9P-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PTGFRN critici per la funzione di CD9P-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTGFRN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD9P-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CD9P-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTGFRN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD9P-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CD9P-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTGFRN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTGFRN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.