CD98 Plasmide Double Nickase (m): sc-421615-NIC

Slc3a2 codifica CD98 (4F2hc), una glicoproteina di membrana di tipo II che forma eterodimeri con le catene leggere della famiglia SLC7 per supportare il trasporto di amminoacidi neutri e a catena ramificata e l’omeostasi metabolica. Oltre all’assemblaggio e al traffico dei trasportatori, CD98 regola l’adesione integrino-dipendente e la segnalazione “outside-in”, influenzando l’organizzazione del citoscheletro, la migrazione cellulare e vie di sopravvivenza come FAK/PI3K/AKT e MAPK. Nei sistemi murini, l’attività di Slc3a2 collega il sensing dei nutrienti a programmi proliferativi e di risposta allo stress, rendendolo rilevante per studi sull’attivazione delle cellule immunitarie, la biologia della barriera epiteliale e il rimodellamento tissutale. Il trasporto associato a CD98 e la segnalazione integrinica deregolati sono spesso analizzati in contesti di patologia infiammatoria e trasformazione oncogenica, senza implicare esiti clinici.

CD98 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc3a2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc3a2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc3a2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc3a2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.