CD97 Plasmide Double Nickase (h): sc-404492-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD97 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD97 Double Nickase Plasmid (h) e il CD97 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADGRE5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD97 Antibody (G-8): sc-166852
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD97 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404492-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD97 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404492-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADGRE5 codifica per CD97, un recettore di adesione accoppiato a proteina G (GPCR) espresso in modo prominente sui leucociti e coinvolto nelle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice all’interno dei compartimenti immunitari e stromali. CD97 interagisce con ligandi quali CD55/DAF e il solfato di condroitina, coordinando programmi di adesione, migrazione e attivazione che si intersecano con la segnalazione infiammatoria e con il rimodellamento del citoscheletro. Attraverso la segnalazione mediata da GPCR e le dinamiche recettore–ligando sulla superficie cellulare, CD97 può influenzare il traffico leucocitario, l’infiltrazione tissutale e la sorveglianza immunitaria. Un’espressione o un’attività disregolata di CD97 è stata associata a patologie infiammatorie e alla biologia del microambiente tumorale, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici della regolazione immunitaria e del comportamento cellulare associato alla malattia.
CD97 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADGRE5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADGRE5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADGRE5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADGRE5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.