CD88 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401968-ACT

C5AR1 codifica CD88, un recettore accoppiato a proteina G per l’anafilotossina del complemento C5a, che collega il riconoscimento immunitario innato a una rapida attivazione dei leucociti. La segnalazione di CD88 innesca vie dipendenti da Gαi, tra cui PI3K–AKT, MAPK/ERK e NF-κB, promuovendo chemotassi, degranulazione, burst ossidativo e rilascio di citochine nelle linee mieloidi. Attraverso questi processi, CD88 contribuisce a coordinare l’infiammazione guidata dal complemento e il traffico leucocitario all’interno dei microambienti tissutali. Un’attività disregolata di C5AR1 è stata associata a contesti infiammatori e autoimmuni, a cascate infiammatorie di tipo settico e alla biologia mieloide associata ai tumori, rendendolo rilevante per studi di immunologia meccanicistica.

CD88 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C5AR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD88 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C5AR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C5AR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD88. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C5AR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD88 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD88 nelle cellule tumorali con espressione di C5AR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.