CD8-β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400950-ACT

CD8B codifica per la catena CD8-β, una glicoproteina transmembrana di tipo I che si associa a CD8-α per formare il co-recettore CD8 sui linfociti T citotossici e su un sottogruppo di cellule NK. Legandosi alle molecole MHC di classe I e associandosi alla chinasi LCK della famiglia Src, CD8 potenzia la trasduzione del segnale del recettore dei linfociti T, favorisce la formazione della sinapsi immunologica e contribuisce alla selezione timica e alla differenziazione effettrice. L’espressione di CD8B e la funzione del co-recettore CD8 sono strettamente correlate alle risposte citotossiche antigene-specifiche, alla sorveglianza immunitaria e alle dinamiche di esaurimento dei linfociti T nelle infezioni croniche e nel microambiente tumorale. La deregolazione della segnalazione associata a CD8 e gli stati alterati dei linfociti T CD8+ sono frequentemente oggetto di studio nell’immunologia dei tumori, nell’autoimmunità e nella ricerca sulle immunodeficienze primarie.

CD8-β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD8B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD8-β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD8B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD8B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD8-β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD8B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD8-β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD8-β nelle cellule tumorali con espressione di CD8B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.