CD8-α Plasmide Double Nickase (h): sc-400372-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD8-α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD8-α Double Nickase Plasmid (h) e il CD8-α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD8A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD8-α Antibody (D-9): sc-7970
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD8-α Plasmide Double Nickase (h) | sc-400372-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD8-α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400372-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD8A codifica per CD8-α, una glicoproteina transmembrana di tipo I che forma omodimeri CD8αα o eterodimeri CD8αβ sui linfociti T e su un sottogruppo di cellule NK. CD8-α agisce come co-recettore per il riconoscimento dell’antigene ristretto al complesso MHC di classe I, associandosi al complesso del TCR e reclutando LCK per amplificare la segnalazione prossimale del TCR, favorendo la differenziazione effettrice citotossica e la formazione della sinapsi immunologica. Attraverso il suo impatto su vie a valle come la fosforilazione di ZAP70, la segnalazione MAPK e programmi trascrizionali dipendenti dal calcio, CD8A contribuisce a plasmare le risposte antigene-specifiche e la sorveglianza immunitaria. L’espressione alterata di CD8A e i pattern di infiltrazione dei linfociti T CD8+ sono ampiamente utilizzati come correlati immunologici negli studi su infezioni, autoimmunità e microambiente tumorale, chiarendo i meccanismi di evasione immunitaria e di disfunzione delle cellule T.
CD8-α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD8A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD8A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD8A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD8A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.