CD8-α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400372

Panoramica

CD8A codifica CD8-α, una glicoproteina di membrana di tipo I che forma omodimeri CD8αα o eterodimeri CD8αβ sulle cellule T e su un sottogruppo di cellule NK, agendo da co-recettore per il riconoscimento dell’antigene ristretto al complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe I. Legandosi a MHC I e associandosi a LCK, CD8-α favorisce la segnalazione del TCR, la formazione della sinapsi immunologica e le vie a valle che controllano la differenziazione degli effettori citotossici e la produzione di citochine. L’espressione di CD8A è ampiamente utilizzata per definire gli stati dei linfociti citotossici e per analizzare i programmi di specificazione di linea, attivazione ed esaurimento. La disregolazione della segnalazione dipendente da CD8-α e dei fenotipi delle cellule T CD8+ è rilevante nei contesti di studio del microambiente immunitario tumorale, delle infezioni virali croniche, dell’autoimmunità e delle immunodeficienze.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD8-α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CD8A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CD8A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CD8A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD8-α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CD8A per lo studio della segnalazione di CD8-α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CD8A critici per la funzione di CD8-α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CD8A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD8-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CD8-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CD8A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD8-α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CD8-α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CD8A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CD8A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.