CD8-α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400372

Descripción general

CD8A codifica CD8-α, una glicoproteína transmembrana de tipo I que forma homodímeros CD8αα o heterodímeros CD8αβ en linfocitos T y en un subconjunto de células NK, actuando como correceptor en el reconocimiento de antígenos restringido por el MHC de clase I. Al unirse al MHC I y asociarse con LCK, CD8-α potencia la señalización del TCR, la formación de la sinapsis inmunológica y las vías posteriores que controlan la diferenciación de efectores citotóxicos y la producción de citocinas. La expresión de CD8A se utiliza ampliamente para definir estados de linfocitos citotóxicos y para desentrañar programas de especificación de linaje, activación y agotamiento. La desregulación de la señalización dependiente de CD8-α y de los fenotipos de linfocitos T CD8+ es relevante en contextos de investigación sobre el microambiente inmunitario tumoral, infecciones virales crónicas, autoinmunidad y deficiencias inmunitarias.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD8-α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CD8A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CD8A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CD8A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD8-α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CD8A para la investigación de la señalización de CD8-α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CD8A críticos para la función de CD8-α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CD8A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CD8-α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CD8-α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CD8A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD8-α (h) y el plásmido HDR CD8-α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CD8A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CD8A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.