CD72 Plasmide Double Nickase (h): sc-404054-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD72 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD72 Double Nickase Plasmid (h) e il CD72 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD72. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD72 Antibody (G-5): sc-25265
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD72 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404054-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD72 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404054-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD72 è una glicoproteina transmembrana di tipo II a espressione ristretta alle cellule B, che funge da co-recettore immunoregolatorio collegando i segnali del recettore dell’antigene a vie intracellulari inibitorie. Attraverso la fosforilazione del motivo inibitorio basato su tirosina dei recettori immunitari (ITIM) e il reclutamento di fosfatasi quali SHP-1/SHIP, CD72 modula le soglie di attivazione guidate dal BCR, il flusso di calcio e la segnalazione a valle delle vie MAPK e PI3K. CD72 lega anche il ligando della famiglia delle semaforine SEMA4D (CD100), influenzando le interazioni tra cellule B e cellule T, le risposte del centro germinativo e la tolleranza periferica. Una segnalazione deregolata di CD72 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi delle cellule B e all’autoimmunità, e la sua espressione e il contesto delle relative vie di segnalazione sono spesso analizzati negli studi sulla biologia delle neoplasie delle cellule B e sul microambiente immunitario.
CD72 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD72 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD72. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD72. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD72 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.