CD71/TFRC/Transferrin Receptor Plasmide Double Nickase (h): sc-400310-NIC

TFRC (CD71) codifica il recettore della transferrina, una glicoproteina di membrana di tipo II che media l'endocitosi clatrina-dipendente del ferro legato alla transferrina e contribuisce all'omeostasi del ferro cellulare. Il traffico e il riciclo del recettore sono accoppiati all'acidificazione endosomiale, al rilascio del ferro e al coordinamento di processi ferro-dipendenti, tra cui la respirazione mitocondriale, la sintesi dell'eme e l'attività della ribonucleotide reduttasi per la sintesi del DNA. L'espressione di TFRC è strettamente regolata dalla segnalazione basata su elementi responsivi al ferro/proteine regolatrici del ferro (IRE/IRP) e spesso correla con lo stato proliferativo, a causa dell'elevata richiesta di ferro. La gestione del ferro mediata da TFRC, quando deregolata, viene studiata in contesti quali anemia, neurodegenerazione, biologia delle infezioni e metabolismo delle cellule tumorali, in cui un'alterata captazione del ferro può influenzare lo stress ossidativo e i programmi di crescita.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TFRC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TFRC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TFRC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TFRC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.