Plásmido Doble Nickase (h) CD71/TFRC/Transferrin Receptor: sc-400310-NIC

TFRC (CD71) codifica el receptor de transferrina, una glucoproteína de membrana tipo II que media la endocitosis dependiente de clatrina del hierro unido a la transferrina y contribuye a la homeostasis del hierro celular. El tráfico y el reciclaje del receptor están acoplados a la acidificación endosomal, la liberación de hierro y la coordinación de procesos dependientes del hierro, incluida la respiración mitocondrial, la síntesis de hemo y la actividad de la ribonucleótido reductasa para la síntesis de ADN. La expresión de TFRC está estrictamente regulada por la señalización de los elementos de respuesta al hierro/proteínas reguladoras del hierro y a menudo se correlaciona con el estado proliferativo debido a la elevada demanda de hierro. La desregulación del manejo del hierro ligado a TFRC se estudia en contextos como la anemia, la neurodegeneración, la biología de las infecciones y el metabolismo de células tumorales, donde la captación alterada de hierro puede influir en el estrés oxidativo y en programas de crecimiento.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TFRC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TFRC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TFRC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TFRC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.