CD63 Plasmide Double Nickase (h): sc-400061-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD63 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD63 Double Nickase Plasmid (h) e il CD63 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD63. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD63 Antibody (E-12): sc-365604
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD63 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD63 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD63 (tetraspanina-30) è una tetraspanina ampiamente espressa, arricchita su endosomi tardivi, lisosomi ed esosomi, dove contribuisce a organizzare microdomini arricchiti in tetraspanine che coordinano il traffico e la segnalazione delle proteine di membrana. Interagendo con integrine e recettori immunitari, CD63 regola la maturazione endosomiale, l’ancoraggio e la fusione delle vescicole, il processamento dell’antigene e le vie legate all’adesione cellulare. CD63 è comunemente utilizzata come marcatore di vescicole extracellulari ed è implicata in processi quali la modulazione immunitaria, l’ingresso/uscita dei virus e la regolazione dell’attività delle proteasi nei granuli secretori. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di CD63 sono state associate a risposte infiammatorie e a fenotipi di invasione/metastasi nelle cellule tumorali, stimolando studi meccanicistici sul suo ruolo nella dinamica di membrana e nella comunicazione intercellulare.
CD63 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD63 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD63. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD63. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD63 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.