CD55 Plasmide Double Nickase (h): sc-400738-NIC

CD55 (fattore acceleratore del decadimento) è una proteina regolatrice del complemento ancorata tramite GPI che protegge le cellule dell’ospite dai danni mediati dal complemento accelerando il decadimento delle convertasi C3/C5. Limitando la formazione dei complessi effettori a valle, CD55 contribuisce a modulare la sorveglianza immunitaria innata e influenza la segnalazione infiammatoria sulla superficie cellulare e all’interno del microambiente. Un’espressione o una funzione alterata di CD55 è associata a un’attivazione disregolata del complemento ed è stata studiata in contesti che includono disordini emolitici, autoimmunità e meccanismi di evasione immunitaria tumorale. In vitro, CD55 è comunemente utilizzata come marcatore e nodo funzionale per studiare la sensibilità al complemento, il traffico delle proteine di membrana e le interazioni tra cellule immunitarie.

CD55 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD55 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD55. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD55. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD55 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.