CD30 Plasmide Double Nickase (m): sc-423446-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD30 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD30 Double Nickase Plasmid (m) e il CD30 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tnfrsf8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD30 Antibody (C-3): sc-46683
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD30 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423446-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD30 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423446-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Tnfrsf8 codifica CD30, un membro della superfamiglia dei recettori del TNF espresso sui linfociti attivati, che funge da recettore costimolatorio modulando l’attivazione e la differenziazione immunitaria. Il legame a CD30 recluta proteine adattatrici per avviare a valle la segnalazione NF-κB e MAPK, influenzando la produzione di citochine e i programmi di proliferazione e sopravvivenza nelle cellule immunitarie. Nei modelli sperimentali, un’alterata segnalazione di CD30 è stata associata a risposte infiammatorie disregolate e a cambiamenti negli stati di attivazione dei linfociti. Queste proprietà rendono CD30 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione mediata da recettori e sulle decisioni di destino delle cellule immunitarie.
CD30 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tnfrsf8 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tnfrsf8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tnfrsf8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tnfrsf8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.