CD24 Plasmide Double Nickase (m): sc-419540-NIC

Cd24a codifica la proteina di superficie CD24 ancorata tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI), una molecola immunomodulatrice fortemente glicosilata espressa in molteplici tipi cellulari ematopoietici ed epiteliali nel topo. CD24 partecipa alle interazioni cellula–cellula e alla modulazione delle risposte immunitarie innate e adattative, influenzando l’attivazione dei leucociti, le dinamiche di adesione e i programmi di differenziamento. Attraverso una segnalazione dipendente dal ligando e l’associazione con microdomini di membrana, CD24 può modellare le cascate di segnalazione infiammatoria e incidere su processi quali la risposta agli antigeni e l’omeostasi tissutale. Un’espressione deregolata di Cd24a è stata collegata ad alterazioni della regolazione immunitaria e della plasticità cellulare in contesti rilevanti per la malattia, supportandone l’uso come strumento molecolare per studiare fenotipi associati all’infiammazione e le interazioni tumore–sistema immunitario nei modelli murini.

CD24 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cd24a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cd24a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cd24a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cd24a interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.