CD229 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404895-ACT

LY9 codifica CD229, un immunorecettore della famiglia SLAM espresso prevalentemente sui linfociti, dove modula le interazioni cellula–cellula e le soglie di segnalazione durante l’attivazione immunitaria. CD229 partecipa a vie immunoregolatorie collegate alla segnalazione dei recettori delle cellule T e B, influenzando le risposte citochiniche, la proliferazione e la differenziazione attraverso cascate di segnalazione dipendenti da adattatori. Modellando la comunicazione tra linfociti nei centri germinali e nelle nicchie immunitarie periferiche, CD229 contribuisce all’omeostasi e alla tolleranza immunitaria. Un’espressione o una segnalazione deregolate di LY9/CD229 sono state associate a fenotipi immunitari alterati e sono state studiate nel contesto della biologia delle malattie immunomediate ed ematologiche.

CD229 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LY9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD229 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LY9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LY9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD229. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LY9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD229 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD229 nelle cellule tumorali con espressione di LY9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.