Plásmido CRISPR de Activación (h) CD229: sc-404895-ACT

LY9 codifica CD229, un inmunorreceptor de la familia SLAM que se expresa predominantemente en linfocitos, donde modula las interacciones célula–célula y los umbrales de señalización durante la activación inmunitaria. CD229 participa en vías inmunorreguladoras vinculadas a la señalización de los receptores de células T y B, e influye en las respuestas de citocinas, la proliferación y la diferenciación mediante cascadas de señalización dependientes de adaptadores. Al moldear la comunicación de los linfocitos dentro de los centros germinales y de los nichos inmunitarios periféricos, CD229 contribuye a la homeostasis y la tolerancia inmunitarias. La expresión o la señalización desregulada de LY9/CD229 se ha asociado con fenotipos inmunitarios alterados y se ha investigado en el contexto de la biología de enfermedades inmunomediadas y hematológicas.

CD229 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LY9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD229 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LY9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LY9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD229. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LY9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD229 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD229 en células tumorales con expresión de LY9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.