CD22 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419539-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD22 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- CD22 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal CD22 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal CD22 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Cd22. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD22 Antibody (MYG13): sc-7323
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD22 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-419539-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino Cd22 codifica CD22, una lectina di tipo Ig che lega l’acido sialico, espressa in modo ristretto alle cellule B e che funge da corecettore inibitorio del recettore dell’antigene delle cellule B (BCR). Attraverso i suoi motivi citoplasmatici ITIM, CD22 recluta fosfatasi come SHP-1 per attenuare il segnalamento prossimale del BCR, modulando il flusso di calcio, l’attività delle MAPK e i programmi trascrizionali a valle che regolano le soglie di attivazione e la tolleranza. CD22 contribuisce anche all’adesione e al traffico delle cellule B riconoscendo glicani sialilati con legami α2,6, influenzando le interazioni all’interno dei microambienti linfoidi. Alterazioni nella segnalazione e nell’espressione di CD22 sono associate a risposte umorali modificate e a fenotipi di tolleranza immunitaria, a conferma della sua rilevanza negli studi sulla disregolazione delle cellule B e sui meccanismi legati all’autoimmunità.
CD22 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cd22 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
CD22 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cd22 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cd22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD22. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cd22 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD22 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD22 nelle cellule tumorali con espressione di Cd22 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.