CD163 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-429989-ACT

Il gene murino Cd163 codifica CD163, un recettore scavenger ristretto ai macrofagi della famiglia SRCR che lega i complessi emoglobina–aptoglobina e ne promuove l’endocitosi, sostenendo il catabolismo dell’eme e il riciclo del ferro tramite la via HO-1. CD163 è un marcatore distintivo dei macrofagi attivati in modo alternativo (tipo M2-like) e partecipa a programmi di rimozione/clearance che modellano la risoluzione dell’infiammazione, le reti citochiniche e il rimodellamento tissutale. La sua espressione è modulata da segnali infiammatori e si interseca con la segnalazione dell’immunità innata e con il traffico fagocitico, influenzando gli stati di polarizzazione dei macrofagi. Variazioni dei livelli di CD163 sono spesso utilizzate per contestualizzare il coinvolgimento dei macrofagi nell’infiammazione cronica, nel rimodellamento fibrotico, nella disfunzione metabolica, nelle infezioni e nella biologia dei macrofagi associati al tumore in modelli murini.

CD163 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cd163 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD163 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cd163 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cd163, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD163. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cd163 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD163 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD163 nelle cellule tumorali con espressione di Cd163 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.