Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CD14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400344
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD14 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CD14, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD14 Antibody (5A3B11B5): sc-58951
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400344 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CD14 è un co-recettore di riconoscimento dei pattern ancorato al glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che lega il lipopolisaccaride batterico (LPS) insieme a LBP e trasferisce i ligandi al complesso TLR4–MD-2 per avviare la segnalazione dell’immunità innata. Agisce in monociti, macrofagi e cellule dendritiche amplificando le vie dipendenti da MyD88 e TRIF, promuovendo l’attivazione di NF-κB e degli IRF, la produzione di citochine e l’espressione di geni infiammatori. Oltre al riconoscimento delle endotossine, CD14 contribuisce al riconoscimento di diversi pattern molecolari associati a patogeni e a danno (PAMP e DAMP) e modula la fagocitosi e la presentazione dell’antigene. Una segnalazione di CD14 deregolata è stata associata a risposte infiammatorie anomale coinvolte nella biologia della sepsi, in disturbi infiammatori cronici e in fenotipi mieloidi associati al tumore rilevanti per la regolazione immunitaria.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CD14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CD14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CD14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD14.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CD14 per lo studio della segnalazione di CD14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CD14 critici per la funzione di CD14
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CD14 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CD14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CD14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CD14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CD14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CD14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CD14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CD14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.