CAT Plasmide Double Nickase (h): sc-404860-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CAT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CAT Double Nickase Plasmid (h) e il CAT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRAT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CAT Antibody (654D2Y): sc-517650
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CAT Plasmide Double Nickase (h) | sc-404860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CAT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRAT codifica la carnitina O-acetiltransferasi (CAT), un enzima della matrice mitocondriale che catalizza il trasferimento reversibile di gruppi acetile tra acetil-CoA e carnitina, formando acetilcarnitina. Questa reazione collega la β-ossidazione degli acidi grassi, l’utilizzo dell’acetil-CoA derivato dal piruvato e il mantenimento dei pool mitocondriali di CoA, influenzando così l’equilibrio redox e la flessibilità metabolica. Modulando il buffering dei gruppi acetile e i profili delle acilcarnitine, la CAT contribuisce alla regolazione del metabolismo energetico durante i cambiamenti di disponibilità di nutrienti e in condizioni di stress. Un flusso acetilico dipendente dalla carnitina alterato e l’accumulo di acilcarnitine sono ampiamente utilizzati come readout biochimici negli studi su sindrome metabolica, insulino-resistenza e disfunzione mitocondriale, rendendo CRAT un nodo utile per indagini meccanicistiche.
CAT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRAT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRAT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRAT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRAT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.