caspase-12 Plasmide Double Nickase (m): sc-419463-NIC

Il gene murino **Casp12** codifica la caspasi-12, una proteasi cisteina-aspartato associata alla modulazione della segnalazione infiammatoria e delle risposte allo stress del reticolo endoplasmatico (RE). La caspasi-12 è stata implicata nella regolazione delle cascate di attivazione delle caspasi e nell’intersezione con vie dell’immunità innata, incluse le risposte a componenti microbiche e la segnalazione mediata da citochine infiammatorie. Nei sistemi murini, l’attività e l’espressione di **Casp12** vengono comunemente studiate nel contesto del danno tissutale associato all’infiammazione, delle interazioni ospite–patogeno e dell’apoptosi indotta da stress. La disregolazione di questi processi è rilevante in modelli sperimentali di infiammazione simile alla sepsi, neuroinfiammazione e stress metabolico, nei quali **Casp12** può influenzare l’equilibrio tra l’output infiammatorio e la sopravvivenza cellulare.

caspase-12 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Casp12 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Casp12. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Casp12. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Casp12 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.