calsequestrin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403375-NIC

CASQ1 codifica la calsequestrina 1, una proteina ad alta capacità di legare Ca²⁺ localizzata nel lume del reticolo sarcoplasmatico nel muscolo scheletrico, dove tampona il Ca²⁺ e contribuisce a modellare l’accoppiamento eccitazione–contrazione. Modulando la disponibilità di Ca²⁺ nel lume e la cinetica di rilascio del Ca²⁺ mediata dal recettore della rianodina (RYR1), la calsequestrina 1 contribuisce all’omeostasi del Ca²⁺ e al coordinamento dei cicli di contrazione/rilassamento muscolare. Alterazioni della funzione o dell’espressione di CASQ1 possono perturbare la segnalazione intracellulare del Ca²⁺ e le risposte allo stress associate a un rilascio anomalo di Ca²⁺, a una contrattilità compromessa e a una maggiore suscettibilità a fenotipi di disfunzione muscolare. In quanto nodo centrale nella gestione del Ca²⁺ nel reticolo sarcoplasmatico, CASQ1 è rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione Ca²⁺-dipendente, sulla proteostasi e sul rimodellamento metabolico nelle miofibre.

calsequestrin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CASQ1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CASQ1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CASQ1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CASQ1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.