Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Calregulin Plasmide Double Nickase (m): sc-419428-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Calregulin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Calregulin Double Nickase Plasmid (m) e il Calregulin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Calr. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Calregulin Antibody (F-4): sc-373863
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Calregulin Plasmide Double Nickase (m) | sc-419428-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Calr** codifica la **calreticulina**, uno chaperone legante Ca2+ localizzato prevalentemente nel reticolo endoplasmatico, dove supporta il ripiegamento delle glicoproteine e il controllo qualità tramite il ciclo calnexina/calreticulina. Regolando l’omeostasi del Ca2+ nel RE e interagendo con proteine nascenti, la calreticulina influenza la segnalazione da stress del RE, la risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR) e le vie di proteostasi a valle. **Calr** partecipa anche all’adesione cellulare e a segnali extracellulari rilevanti per il sistema immunitario quando è esposta sulla superficie cellulare, collegandola a processi associati all’infiammazione. Una funzione deregolata della calreticulina è stata associata, in sistemi sperimentali, ad alterazioni della segnalazione del Ca2+, a stress da mal ripiegamento proteico e a fenotipi pertinenti all’oncogenesi e a disfunzioni ematopoietiche.
Calregulin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Calr nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Calr. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Calr. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Calr interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.