cadherin-19 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401716-ACT

O CDH19 humano codifica a caderina-19, uma molécula de adesão célula–célula dependente de cálcio que sustenta a arquitetura dos tecidos e a sinalização celular coordenada no sistema nervoso. Como membro da família das caderinas clássicas, a caderina-19 participa da montagem de junções aderentes por meio de interações homofílicas e do acoplamento funcional às cateninas e ao citoesqueleto de actina, influenciando vias dependentes de adesão que regulam a polaridade celular, a migração e a diferenciação. A expressão de CDH19 tem sido associada a programas de desenvolvimento e à especificação de linhagens, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos que alteram a conectividade celular e as transições de estado em tecidos complexos. A desregulação da adesão mediada por caderinas é frequentemente implicada em alterações do comportamento celular associadas a doenças, incluindo diferenciação aberrante e fenótipos invasivos, motivando investigações focadas em CDH19 em modelos de neurobiologia e relacionados ao câncer.

cadherin-19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH19 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cadherin-19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH19 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH19, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cadherin-19. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH19 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cadherin-19 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cadherin-19 em células tumorais com expressão de CDH19 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.