Plásmido CRISPR de Activación (h) cadherin-19: sc-401716-ACT

El CDH19 humano codifica la cadherina-19, una molécula de adhesión célula–célula dependiente de calcio que sostiene la arquitectura tisular y la señalización celular coordinada en el sistema nervioso. Como miembro de la familia de las cadherinas clásicas, la cadherina-19 participa en el ensamblaje de las uniones adherentes mediante interacciones homofílicas y su acoplamiento funcional a las cateninas y al citoesqueleto de actina, influyendo en vías dependientes de la adhesión que regulan la polaridad, la migración y la diferenciación celular. La expresión de CDH19 se ha asociado con programas del desarrollo y la especificación de linaje, lo que la hace relevante para estudiar mecanismos que alteran la conectividad celular y las transiciones de estado en tejidos complejos. La desregulación de la adhesión mediada por cadherinas se implica con frecuencia en cambios del comportamiento celular asociados a enfermedad, incluida la diferenciación aberrante y fenotipos invasivos, lo que impulsa investigaciones centradas en CDH19 en neurobiología y en modelos relacionados con cáncer.

cadherin-19 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDH19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cadherin-19 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDH19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDH19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cadherin-19. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDH19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cadherin-19 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cadherin-19 en células tumorales con expresión de CDH19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.