Plásmido Doble Nickase (h) CA VIII: sc-403750-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CA VIII consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CA VIII (h) y el plásmido de doble nickasa CA VIII (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CA8. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CA VIII Anticuerpo (E-4): sc-166626
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CA VIII | sc-403750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CA VIII | sc-403750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La anhidrasa carbónica VIII (CA VIII), codificada por el gen humano **CA8**, es un miembro no catalítico de la familia de las anhidrasas carbónicas que modula la señalización intracelular en lugar de la hidratación del CO₂. CA VIII se une al receptor de inositol 1,4,5-trifosfato tipo 1 (ITPR1) y lo inhibe, moldeando la liberación de Ca²⁺ dependiente de IP₃ desde el retículo endoplásmico e influyendo así en la excitabilidad neuronal, la plasticidad sináptica y la coordinación motora cerebelosa. A través de su impacto en vías reguladas por Ca²⁺, incluidos programas de transcripción dependientes de CaMK y de la calcineurina, **CA8** contribuye al control homeostático de la señalización del calcio. La alteración genética o la desregulación de **CA8** se ha vinculado a disfunción cerebelosa y a la neurobiología relacionada con la ataxia, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización del calcio en sistemas neuronales.
CA VIII El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CA8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CA8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CA8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CA8 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.