CA VIII Plasmide Double Nickase (h): sc-403750-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CA VIII Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CA VIII Double Nickase Plasmid (h) e il CA VIII Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CA8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CA VIII Antibody (E-4): sc-166626
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CA VIII Plasmide Double Nickase (h) | sc-403750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CA VIII Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’anidrasi carbonica VIII (CA VIII), codificata dal gene umano **CA8**, è un membro acatalitico della famiglia delle anidrasi carboniche che modula la segnalazione intracellulare piuttosto che l’idratazione della CO₂. La CA VIII si lega al recettore dell’inositolo 1,4,5-trisfosfato di tipo 1 (ITPR1) e lo inibisce, plasmando il rilascio di Ca²⁺ dal reticolo endoplasmatico dipendente da IP₃ e influenzando così l’eccitabilità neuronale, la plasticità sinaptica e la coordinazione motoria cerebellare. Attraverso il suo impatto su vie regolate dal Ca²⁺, inclusi i programmi trascrizionali dipendenti da CaMK e calcineurina, CA8 contribuisce al controllo omeostatico della segnalazione del calcio. L’alterazione genetica o la disregolazione di CA8 è stata collegata a disfunzioni cerebellari e alla neurobiologia associata all’atassia, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici della segnalazione del calcio nei sistemi neuronali.
CA VIII Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CA8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CA8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CA8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CA8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.