C3G Plasmide Double Nickase (h): sc-401616-NIC

RAPGEF1 codifica C3G, un fattore di scambio dei nucleotidi guaninici che attiva Rap1 e altre piccole GTPasi correlate per coordinare l’adesione integrina-dipendente, il rimodellamento del citoscheletro e la migrazione cellulare. Attraverso il reclutamento mediato da adattatori a valle delle tirosin-chinasi recettoriali e dei recettori immunitari, C3G contribuisce a collegare gli stimoli extracellulari alla segnalazione MAPK e Rap1, influenzando proliferazione, differenziamento e traffico vescicolare. In contesti ematopoietici ed epiteliali, l’alterazione di RAPGEF1 è stata associata a una dinamica modificata delle giunzioni cellula-cellula e a reti di segnalazione deregolate, rilevanti per la trasformazione oncogenica e la funzione delle cellule immunitarie. In quanto nodo di via che connette la fosforilazione su tirosina alle risposte guidate da Rap, C3G è spesso studiato in modelli di invasione, attivazione leucocitaria e plasticità della segnalazione indotta dai recettori.

C3G Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAPGEF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAPGEF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAPGEF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAPGEF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.