C3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-419391-LAC-2

Il gene murino C3 codifica il componente 3 del complemento, un nodo centrale della cascata del complemento che viene processato proteoliticamente in C3a e C3b per promuovere l’opsonizzazione, il reclutamento delle cellule immunitarie e l’amplificazione delle risposte immunitarie innate attraverso le vie classica, lectinica e alternativa. L’attivazione di C3 favorisce l’eliminazione di patogeni e complessi immuni, regola l’interazione con la coagulazione e con la segnalazione infiammatoria e contribuisce all’omeostasi tissutale influenzando la fagocitosi e la produzione di citochine. Un’attività di C3 deregolata è associata a infiammazione mediata dal complemento e a patologie da immunocomplessi, con rilevanza per modelli di autoimmunità, infezione e processi neuroinfiammatori. L’editing genetico di C3 nei sistemi murini consente studi meccanicistici sull’attivazione del complemento, sulle interazioni recettore‑ligando e sugli esiti funzionali in vivo e in saggi su cellule immunitarie primarie.

Le particelle di attivazione lentivirale C3 (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di C3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale C3 (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione C3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di C3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo C3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.