C1QBP Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419387-ACT

C1qbp codifica C1QBP, una proteina multifunzionale associata ai mitocondri e alla superficie cellulare, implicata nella funzione del ribosoma mitocondriale, nell’omeostasi della fosforilazione ossidativa e nella regolazione delle risposte cellulari allo stress. Nelle cellule di topo, C1QBP è stata collegata al controllo dell’apoptosi, all’adattamento metabolico e alla segnalazione dell’immunità innata attraverso interazioni che influenzano processi legati al complemento e segnali infiammatori. L’alterazione dell’espressione di C1QBP può rimodellare il metabolismo energetico e la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, con effetti su vie rilevanti per la capacità proliferativa e l’omeostasi dei tessuti. Queste funzioni rendono C1qbp un bersaglio utile per studiare i meccanismi della disfunzione mitocondriale e i fenotipi associati all’infiammazione in modelli rilevanti per la malattia.

C1QBP Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C1qbp senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C1QBP Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C1qbp nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C1qbp, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C1QBP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C1qbp nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C1QBP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C1QBP nelle cellule tumorali con espressione di C1qbp silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.