c-Maf Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410543-ACT

MAF codifica c-Maf, un fattore di trascrizione della famiglia bZIP (basic leucine zipper) che controlla la specificazione di linea e i programmi di differenziamento nei tessuti immunitari e non immunitari. c-Maf integra segnali provenienti da vie di risposta a citochine e stress per regolare reti trascrizionali coinvolte nella polarizzazione delle cellule T, nella funzione dei macrofagi e nell’adattamento cellulare a segnali metabolici. Attraverso la modulazione dell’attività degli enhancer e la cooperazione con altri regolatori trascrizionali, c-Maf influenza processi quali proliferazione, sopravvivenza ed espressione dei geni effettrici. Un’espressione o un’attività deregolata di MAF è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria e a stati trascrizionali osservati in diversi contesti di ricerca sulle malattie ematologiche e infiammatorie.

c-Maf Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

c-Maf Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di c-Maf. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da c-Maf nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via c-Maf nelle cellule tumorali con espressione di MAF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.