c-Kit Plasmide Double Nickase (m): sc-421289-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- c-Kit Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il c-Kit Double Nickase Plasmid (m) e il c-Kit Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Kit. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: c-Kit Antibody (E-3): sc-365504
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
c-Kit Plasmide Double Nickase (m) | sc-421289-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
c-Kit Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421289-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Kit (c-Kit; Cd117) codifica un recettore tirosin-chinasico per lo stem cell factor che regola la sopravvivenza, la proliferazione e l’impegno di linea nei progenitori ematopoietici, nei melanociti, nelle cellule germinali e nei mastociti. In seguito alla dimerizzazione indotta dal ligando e all’autofosforilazione, c-Kit attiva le vie di segnalazione PI3K–AKT, RAS–MAPK, JAK/STAT e della famiglia SRC per coordinare la progressione del ciclo cellulare, la migrazione e la differenziazione. La deregolazione della segnalazione di KIT e le popolazioni cellulari che esprimono KIT sono ampiamente studiate nella biologia tumorale, nell’infiammazione dei mastociti e nelle patologie allergiche, nonché nei difetti dello sviluppo ematopoietico, supportandone l’uso come nodo di via per studi meccanicistici. Nei modelli murini, la funzione di Kit viene anche sfruttata per indagare la dinamica delle cellule staminali/progenitrici e i segnali del microambiente nello sviluppo e nel mantenimento dei tessuti.
c-Kit Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Kit nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Kit. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Kit. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Kit interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.