c-Abl Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418935

Panoramica

Abl1 nel topo codifica la tirosin-chinasi non recettoriale c-Abl, una proteina di segnalazione multifunzionale che integra segnali provenienti dai recettori dei fattori di crescita, dalle integrine e dallo stress genotossico per regolare proliferazione, rimodellamento del citoscheletro, adesione e apoptosi. L’attività di c-Abl influenza vie che controllano la dinamica dell’actina e il turnover delle adesioni focali, e partecipa alla segnalazione della risposta al danno al DNA attraverso interazioni proteiche dipendenti dalla fosforilazione nel nucleo. Una segnalazione di Abl1 deregolata e un’attività chinasica di c-Abl alterata sono ampiamente rilevanti per la trasformazione oncogenica e per programmi aberranti di sopravvivenza cellulare, rendendo Abl1 un nodo chiave per lo studio delle reti di segnalazione guidate da chinasi. Nei modelli murini, la perturbazione di Abl1 consente indagini meccanicistiche su sviluppo, funzione delle cellule immunitarie e fenotipi di risposta allo stress legati alla segnalazione delle tirosin-chinasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Abl (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Abl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Abl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Abl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina c-Abl.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Abl1 per lo studio della segnalazione di c-Abl, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Abl1 critici per la funzione di c-Abl
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Abl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal c-Abl CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal c-Abl CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Abl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal c-Abl Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR c-Abl (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Abl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Abl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.