Plásmido CRISPR de Activación (h) BTLA: sc-417186-ACT

BTLA (asociado a linfocitos B y T) es un receptor inmunorregulador de la superfamilia CD28 que se expresa en múltiples subpoblaciones de linfocitos, donde actúa como un punto de control inhibidor para restringir la señalización del receptor de antígeno y mantener la tolerancia periférica. Tras la unión con su ligando HVEM (TNFRSF14), BTLA recluta fosfatasas a través de los motivos citoplasmáticos ITIM/ITSM para atenuar las cascadas de quinasas proximales, modulando la activación de las células T, la producción de citocinas y la homeostasis inmunitaria. Esta vía se interconecta con redes coinhibidoras más amplias que calibran las respuestas inmunitarias adaptativas durante la inflamación y la exposición crónica a antígenos. La expresión o la señalización alteradas de BTLA se han asociado con desregulación inmunitaria y se han estudiado en el contexto de la autoinmunidad, la infección y la inmunología tumoral.

BTLA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BTLA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BTLA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BTLA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BTLA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BTLA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BTLA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BTLA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BTLA en células tumorales con expresión de BTLA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.