BTG1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405339-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BTG1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BTG1 Double Nickase Plasmid (h) e il BTG1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BTG1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BTG1 Antibody (2095C1a): sc-81207
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BTG1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405339-NIC | 20 µg | $410.00 |
BTG1 (B-cell translocation gene 1) codifica una proteina antiproliferativa della famiglia TOB/BTG che modula la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e l’apoptosi attraverso un controllo trascrizionale e post-trascrizionale. BTG1 partecipa a vie che regolano la deadenilazione e il turnover dell’mRNA tramite interazioni con componenti del complesso CCR4–NOT e può influenzare programmi trascrizionali legati alla quiescenza cellulare e alle risposte allo stress. In contesti immunitari ed ematopoietici, BTG1 contribuisce a plasmare lo sviluppo dei linfociti e i loro stati di attivazione, e un’alterata espressione o una sua compromissione è stata associata a una proliferazione disregolata. Lesioni genetiche che coinvolgono BTG1 sono state riportate in diversi contesti di neoplasie linfoidi, a supporto della sua rilevanza negli studi sulla stabilità del genoma, sulla segnalazione oncogenica e sul controllo della crescita специфico di linea cellulare.
BTG1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BTG1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BTG1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BTG1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BTG1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.