BTG1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405339-ACT

BTG1 (B-cell translocation gene 1) codifica un regolatore antiproliferativo che modula la progressione del ciclo cellulare e la differenziazione cellulare, con ruoli di rilievo nel controllo di programmi trascrizionali legati alla crescita. BTG1 interagisce con il macchinario trascrizionale e post-trascrizionale, inclusi i complessi di deadenilasi CCR4–NOT, collegandolo al turnover dell’mRNA e alla regolazione fine dell’espressione genica. In contesti immunitari ed ematopoietici, BTG1 contribuisce al controllo omeostatico dell’espansione delle cellule linfoidi e della segnalazione responsiva allo stress. Un’alterata espressione di BTG1 o la perturbazione della sua rete regolatoria sono spesso studiate in relazione a processi oncogenici, in particolare nella biologia delle neoplasie a cellule B e nella correlata disregolazione trascrizionale.

BTG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BTG1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BTG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BTG1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BTG1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BTG1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BTG1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BTG1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BTG1 nelle cellule tumorali con espressione di BTG1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.